Tips Memilih dan Merawat Kolom HPLC!

Pemilihan dan perawatan kolom HPLC menentukan kesuksesan analisis metode Kamu. Kolom berperan signifikan didalam pemisahan komponen didalam sampel. Terhadap dasarnya, tiap-tiap type kolom kromatografi bekerja bersama cara yang serupa. Sampel melewati kolom bersama dengan pertolongan fase mobilitas. Sampel akan berlangsung lewat fase diam terhadap taraf yang berbeda. Supaya, sebabkan komponen di dalam sampel akan memisah bersamaan saat.

Bagi suatu Hplc, kolom yang digunakan tergolong sebagai komponen terpenting. Kolom perlu bisa mencegah backpressure yang diciptakan selama pemakaian. Juga, perlu sediakan jalur genre (Bebas bocor, volume minimum, dan dead volume) untuk sampel di inlet dan pita analit di outlet. Agar, ciri fisik dan juga kimia berasal dari kolom, memengaruhi performa kromatogram.

Tetapi, bagaimana Kamu tahu kolom HPLC yang tepat untuk eksperimen Kamu? Dan juga, bagaimana cara merawat kolom HPLC yang sahih? Simak tips di bawah ini.

 

Baca juga : mikroskop digital

 

 

Pemilihan Kolom HPLC yang Tepat

Pastikan, Kamu kudu mengerti tujuan pemisahan Kamu. Misal, apakah Kamu akan lakukan fase normal atau fase terbalik di Hplc. Didalam fase normal, fase diam adalah hidrofilik (Bersifat polar). Sedangkan, fase diam adalah hidrofobik (Non-Polar). Agar, analit yang dipisahkan bersifat non polar.

Kebalikan bersama dengan fase terbalik, yang lebih generik digunakan. Fase mobilitas terhadap fase terbalik adalah hidrofilik. Saat tersebut, fase diam adalah hidrofobik. Bersama dengan demikian, molekul dielusi bersama turunkan polaritas lewat pemanfaatan pelarut organik.

Kedua model kolom itu yang paling generik ada di beragam merek. Sebenarnya, masih tak terhitung type kolom lainnya, layaknya ion exchange, Hilic, mixed-mode, dan lain lain. Sehabis sadar tujuan pemisahan, yang wajib Kamu laksanakan adalah menentukan keperluan pelaksanaan. Contohnya, keperluan resolusi, taraf sensitivas, biaya operasional, dan lama saat kolom dapat digunakan.

Bagi pengguna liquid chromatography (Lc) berasal dari Thermo Fisher Scientific, pemilihan kolom sebatas membutuhkan saat tidak cukup berasal dari 5 menit! Kamu memadai terhubung link thermofisher.com/order/lc-column-guide/#!/quiz. Pada akhirnya, Kamu tinggal menjawab sebagian pertanyaan disesuaikan bersama dengan pelaksanaan riset Kamu. Ringan tidak?

&Nbsp;

Model Kolom HPLC
Berasal dari banyaknya model kolom yang beredar, kolom HPLC jenis Acclaim didesain bersama ukuran pori yang lebih kecil dan luas permukaan yang lebih tinggi. Supaya, hasil pemisahan beresolusi tinggi dan efisiensi yang tinggi. Acclaim punyai bermacam type kolom yang sesuai bersama fungsionalnya, antara lain: kolom fase terbalik &Amp; general purpose, mixed-mode, application- specific, dan size exclusion (Sec).

Kolom Fase Terbalik :Tujuan Generik
Platform terhadap kolom fase terbalik Hplc, fase geraknya adalah hidrofilik (Polar). Sedangkan, fase diam merupakan hidrofobic (Non-Polar). Platform ini kebalikan berasal dari kolom fase normal. Fase mobilitas di kolom fase normal bersifat hidrofobik dan fase diamnya bersifat hidrofilik.

Tak sekedar kedua style kolom itu, tersedia kolom Hilic. Kolom HILIC kuat menghambat senyawa yang bukan tertahan oleh fase terbalik konvensional, tanpa memerlukan aditif pasangan ion.

Sebagian contoh kolom model ini antara lain: Acclaim 120 C18, Acclaim 120 C8, Acclaim 300 C18, Acclaim Polar Advantage, Acclaim C30, dan Acclaim Hilic-10. Ukuran partikel kolom bervariasi mulai berasal dari 2.2 µm dan 5µm bersama dengan surface tempat 100 m2/g dan 300 m2/g. Pelaksanaan eksperimen yang tepat bagi kolom ini adalah fat-soluble vitamin, steroid, phthalates, acetic acids, artificial sweeteners, cocoamidopropyl betaine, dan lain-lain.

Kolom Mixed-Mode
Kolom mixed-mode bermanfaat memisahkan analit ionic dan hidrofobik didalam sekali analisis. Kemampuan multifungsi ini dapat kurangi persoalan penggantian kolom, pemasangan kolom, atau pemakaian kolom secara seri. Fase diam kolom mixed-mode mencampur manfaat kolom fase terbalik dan pertukaran ion atau Hilic. Kolom mempunyai ukuran partikel mulai berasal dari 3 µm dan 5 µm bersama dengan surface daerah 100 m2/g dan 300 m2/g .

Contoh pelaksanaan yang mampu digunakan analisis adalah phospholipids, kombinasi pereda sakit, antibiotic, suplemen diet, dan lain-lain. Kolom yang terhitung style mixed-mode adalah Acclaim Trinity P1 Lc, Trinity P2 Lc, Mixed Mode Wcx-1 Lc, Mixed Mode Wax-1 Lc, dan Omnipac Pax-100 Hplc.

Kolom Application-Specific
Kolom application-specific dirancang spesifik untuk pelaksanaan farmasi dan lingkungan. Kolom ini memberi tambahan resolusi superior bersama dengan penggunan yang benar-benar gampang. Kolom application-specific mampu digunakan untuk surfaktan, aminoglycoside, carbamate, explosives, Polyaromatic Hydrocarbons (Pahs), dan obat-obatan. Contoh kolom yang terhitung application specific antara lain Acclaim Carbamate Lc, Carbonyl C18 Lc, Surfactant Lc, dan Explosives E2. Ukuran partikel bervariasi mulai 2.2 µm, 3 µm, dan 5 µm.&Nbsp; Kolom application specific punyai surface daerah berasal dari 100 m2/g dan 300 m2/g.

kolom hplc – acclaim
Kolom Size Exclusion (Sec)
Pemisahan terhadap kolom SEC berbeda berasal dari fase terbalik dan metode pemisahan kromatografi lainnya. Mode SEC lebih dari satu besar bergantung terhadap hubungan analit bersama dengan fase dian, SEC membedakan molekul berdasarkan ukuran molekul memakai kolom yang dikemas bersama partikel berpori. Fase diam dirancang untuk meminimalkan tiap-tiap hubungan bersama analit. Dikarenakan, hubungan sekunder antara analit dan partikel kolom bisa berdampak negatif pada retensi. Berbeda berasal dari jenis kolom lainnya, ukuran partikel kolom 5 µm dan 7 µm.

Umumnya, kolom SEC digunakan untuk memisahkan molekul biologis, menentukan distribusi berat molekul protein dan peptide, dan juga memisahkan daftar panjang polimer larut air. Selaras bersama dengan tersebut, kolom SEC dibedakan ulang berdasarkan aplikasinya. Misalnya, untuk pemisahan monoclonal antibody, pemisahan protein dan peptide, dan polimer larut air. Contoh model product kolom SEC adalah Acclaim SEC 300 &Amp; 1000.